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      現貨人白細胞介素-27ELISA檢測試劑盒使用說明書
      瀏覽次數:504發布日期:2015/1/8
      提 供 商: 上海紀寧實業有限公司 資料大?。?/td>
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      人白細胞介素-27ELISA檢測試劑盒

          IL-27試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知IL-27濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將IL-27和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-27的濃度呈比例關系。

      操作注意事項
      1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
      2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
      3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
      4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
      5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
      6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
      7.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
      8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
      9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

      樣品收集、處理及保存方法
      1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
      2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
      3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
      4、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      人白細胞介素-27ELISA檢測試劑盒操作步驟
      1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
      2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
      3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
      4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
      5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
      6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
      7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
      8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
      9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

      試劑盒性能
      1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
      2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
      3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

      人白細胞介素-27ELISA檢測試劑盒結 果 判 斷 與 分 析
      1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

      2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的IL-27標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的IL-27含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

      3、檢測值范圍:0-800pg/ml

      4、敏感度: 1.0 pg/ml

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